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6 |3 {0 L M" [5 b3 D9 ] 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
, i9 z) y2 Z( H- T8 [8 q B; m: r9 HAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......! R" O6 g7 O8 q3 W+ N! `
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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－039 y0 R/ E; x! r9 ^
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) % z$ Q' f' k# C+ M
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus ) r7 ^! }* [- W3 `# V% O* F
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 - B/ R. ^, X* L. Y& z: v% Q
1 材料与方法 7 F7 i5 J5 n2 Q/ R1 o+ c& U# Q
1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。
! h7 L M6 F1 b$ o表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 1 ~8 H7 A7 |# }+ }* y9 L: p# s
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& b5 N' A: u" c* E因素
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降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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ρ（油）/（mg.L-1)+ g2 i; {; z7 T" W
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14: X& A& X# O% N- v* U3 u
* _% T8 S9 Z! @+ d; i- C: v; n $ Y5 V# U/ g9 R7 N& C
表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果 c: K) S2 x9 h; b
8 W( \: N3 v4 z
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! B1 C8 s3 d* a; m6 J! o4 l3 a5 a# ~- R( R }0 v6 e2 D
分组号) P8 W2 z" [( n/ R/ j: l$ z7 R
因素
, m' b, R4 u. ^测定结果ρ（油）/（mg.L-1)$ x! f, J% [* t8 |+ r7 W/ Q
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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9 v1 O& |( Y5 S
1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 / d. o- w1 s6 r( n7 B. L8 k" z/ F0 B
2 结果分析
- |" W. B" p" ] |( ~' U+ E' i2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
+ v) d2 j& m$ s表3 4株机油降解菌形态特征 8 w6 N3 }8 m; E- C( T: l( Z
3 k7 k \! J1 s/ e) Y8 d
* I: n' O6 I: y7 ^5 F! Q2 o
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5 d |0 K( O( E. L形态特征
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ZL2
) s K! o/ A( i3 P! W' HZL3; M8 ]; i, o# O
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3 f4 v" j1 R1 Q; R9 y3 w! a* R菌落颜色
) [: B- u, G% F+ i3 R/ S+ V" _; K粉红
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粉红
; y5 d E( K. [( M
, F9 J0 f) V9 t. v菌落形态
( t( K3 j1 B' ?+ N0 q) h$ Q) k5 f不透明，微隆起，全缘，
( b d% ]: a3 j W$ w半透明，圆形
7 N! F* ?) z8 M& x/ L半透明，圆形，隆起，
( v7 c( i' b# L7 a& d4 w8 i不透明，米粒状突起，
7 O% B2 d! L2 b6 F2 M: {0 J6 h
' ~' a/ y" g* r$ B! r/ d 3 G% x) @4 N m! _! p* C
光滑，有光泽" x( D; o6 G8 P, [/ {/ b
光滑，较干燥6 o! m! U Q: {/ `
光滑，有光泽
- a; u5 F+ f9 R0 e- v3 I) Y5 ~较湿润; ]) Y V, d- m* w# M
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菌体形态* i' g4 L+ W- G0 N; X
短杆
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, c( I0 C% m4 X8 O F \$ E# m6 Q杆状
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' c0 U ~- A6 W1 e$ k
菌体大小/μm9 Q5 ^4 v) O# \8 X
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）4 l1 Y9 {3 I2 @! Q1 r
Φ0.37 u7 Q9 j# u1 S" n8 M1 r3 |2 }4 J
（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
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8 u# Q0 n& s& [, ?1 L
革兰氏染色8 P0 K7 `" y. U/ O% |7 o, `
G- u! H0 a6 V }2 f' L
G
; K" ^: C* O( T& fG
7 @4 Z" f" |% Q* lG
! M2 p) M4 m6 P" Z( e1 r$ G
" Y, I7 g! w5 g初步鉴定
2 ^- D4 \/ ^4 r% n) r' d- s黄杆菌属
h% l. w9 {) L( Z1 [微球菌属
3 ^; ~4 y2 L/ |% q0 C7 {- L! V假单胞菌属& {# o0 g+ d4 }: p6 }
酵母菌属- V0 n" I4 y2 Q+ |' ?) y
2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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3 结论 + a. @0 T" `2 [8 G% j j: |
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 % B" Q9 r- Q' f; ^0 I6 J
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。: T+ k" T% x9 ?3 _- ]4 `
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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